Hva er PCR-analyse?
Polymerase Chain Reaction (PCR) analyse er en laboratorieteknikk designet for å identifisere små mengder DNA i en prøve ved en prosess kjent som amplifikasjon. Under PCR-amplifikasjon kopieres DNA av interesse flere ganger til det er nok av det til analyse og deteksjon. For eksempel kan PCR brukes til å identifisere små mengder DNA fra organismer som forårsaker gonoré eller klamydia som er tilstede i en urinprøve.
Hvordan virker PCR?
Det første trinnet i PCR er å varme prøven slik at det dobbeltstrengede DNA skiller seg i to enkle tråder – dette kalles denaturering. Deretter kombineres primere, korte prøver av DNA som samsvarer med endene av DNA-sekvensen av interesse, med prøven DNA. Etter dette blir en DNA-polymerase brukt til å starte DNA-replikasjon ved primerplasseringen. Endelig oppvarmes DNA’et for å separere strengene en gang til, og hele PCR-prosessen begynner igjen. Mengden av DNA-segmentet av interesse som er tilstede i prøven øker eksponentielt med hver PCR-syklus: en kopi blir to, blir deretter fire, blir deretter åtte, etc; så generelt er det bare 20 til 40 sykluser som trengs for å avgjøre om det aktuelle DNA er tilstede (og, hvis det er, å gi en tilstrekkelig prøve for analyse).
Alle trinnene i en polymerasekjedereaksjon – denaturering av DNA, påføring av primrene og forlengelse av DNA – skjer ved forskjellige temperaturer, så etter at den opprinnelige blanding er satt sammen, kan trinnene styres ved en prosess kjent som
termo-sikring , der temperaturen holdes på de nødvendige nivåene for like lenge som hvert trinn skal skje.Således er PCR en effektiv måte å amplifisere mengden av mål-DNA i et enkelt reagensrør med lite behov for menneskelig inngrep.
Polymerase kjedereaksjon representerte en revolusjon i biologisk teknikk da den ble utviklet tidlig på 1980-tallet, og PCRs skaperen, Kary Mullis, vant Nobelprisen i kjemi for sitt arbeid i 1993.
Hvorfor er PCR Relevant for STD Testing?
Polymerase kjedereaksjon og tilhørende teknikker som ○ ligase kjede reaksjon
, viser seg å være av voksende betydning for STD testing. Dette skyldes at disse teknikkene direkte kan identifisere små mengder virus DNA eller RNA i prøver. Identifisering av et patogenes genetiske kode krever ikke at patogenet er i live – som bakteriekultur eller viral kultur. Det krever heller ikke at infeksjonen har skjedd lenge nok for lenge siden for at folk har utviklet en påviselig antistoffreaksjon (som detekteres av ELISA.) Dette betyr at PCR-teknikker noen ganger kan oppdage sykdommer tidligere enn andre tester, og uten så mye trenger å være opptatt av å holde prøver levende eller test på akkurat riktig tidspunkt.
